任务描述
酶联免疫法和荧光分光光度法研究不同浓度提取物对红色毛癣菌角鲨烯环氧化酶和β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶活性的影响试剂：真菌角鲨烯环氧化酶酶联免疫分析试剂盒，GENMED真菌细胞β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶活性定量检测试剂盒仪器：DNP-9162型电热恒温培养箱，Allegra64R型高速低温离心机，JY 92-Ⅱ型超声波细胞粉碎仪，Bio-Rad550型酶标仪， F2500荧光光度计，强力涡旋振动器，4℃离心机实验分组：生长对照组：提取物低、中、高；实验空白组（空白生长的对照菌）。将不同浓度的提取作用于红色毛癣菌后和空白组在28℃下孵育7天，收集菌丝样品用于酶活性测定。1.收集受试的菌丝样品用于酶活性测定： 角鲨烯环氧化酶活性测定：收集培养液（可以自备），1 000g离心10min分离得到菌丝样品,用PBS(pH 7.0)缓冲溶液漂洗3次，每次1000g离心10min，弃上清。每组精密称取菌丝样品0.3g，各3份，分别加入PBS(pH 7.0)缓冲溶液1ml，置于冰浴上超声破碎细胞，- 20℃放置过夜，次日反复冻融2次，5 000g离心5min，取上清，严格按照ELISA试剂盒说明书进行酶活性测定。2.β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶活性测定：收集培养液，准备5ml待测的新鲜真菌细胞(OD600范围在0.4～0.8之间，即1～ 2×107细胞/ml)，移入到预冷的5ml离心管，置于冰槽里5min，放进4℃离心机离心10min，速度为3000g，小心抽去上清液，加入250μlGENMED裂解液，充分混匀，转移到预冷的1.5ml离心管，加入100μlGENMED强化液，强力涡旋振荡15s，置于冰槽里1min，重复5次，加入250μlGENMED，充分混匀，放进4℃离心机离心10min，速度为1000g，小心移取500μl上清液到新的预冷的1.5ml离心管，即刻放进-70℃保存或置于冰槽里继续后续操作。严格按照试剂盒说明书进行酶活性测定。
