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  • 天成用户

    提交于 2018-03-07 07:03:59

    Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit)是用FITC标记了的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生,可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
    其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
    操作步骤:
    1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
    2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
    3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
    4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
    5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
    6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
    7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

全部回答(1)
  • 闲逛779

    2018-03-07 07:03:59 提交于 2018-03-07 07:03:59

    Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit)是用FITC标记了的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生,可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
    其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
    操作步骤:
    1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
    2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
    3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
    4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
    5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
    6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
    7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。