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聚乙二醇沉淀法浓缩蛋白质实验一​聚乙二醇法

发布时间:2018-11-15 10:34:05 阅读量:196次



实验方法原理

聚乙二醇(PEG)是一个非离子水溶性多聚体,使用 PEG 沉淀蛋甶质时,只在个别浓度下才使蛋白质稍有变性。由于 PEG 溶解时散热低,形成沉淀的子衡时间短等特点,使它在蛋白质的组分分离以及结晶中成为一个有用的试剂。通常 PEG 终浓度达 30% 时,蛋白质就能够达到最大量沉淀。

实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤

1. 向 100 ml 蛋白质溶液中,在缓慢搅拌下加入 150 ml 50% PEG 6000(w/v 溶于蒸馏水);


2. 继续搅拌 30~60 min,至完全沉淀为止;


3. 10 000×g 离心 10 min;


4. 除去上清;


5. 用 1~2 倍沉淀体积的缓冲液再悬浮沉淀。


注意事项

1. 在等电点附近蛋白质溶解度降低。


2. 用硫酸铵沉淀法能够除去 PEG。也可采用离子交换层析,也有报道指出高浓度 PEG 使凝胶过滤柱层析行为异常。

其他