细胞破碎和蛋白质溶解实验一化学渗透法|科研狗实验外包网新闻资讯

细胞破碎和蛋白质溶解实验一化学渗透法

发布时间：2018-11-15 10:33:59 阅读量：695次

实验方法原理	有些有机溶剂（如苯、甲苯）、抗生素、表面活性剂（SDS、Triton X-100）、金属整合剂（EDTA）、变性剂（盐酸胍、脲）等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性，使内含物有选择地渗透出来。这种处理方式就是化学渗透法。本文仅以表面活性剂 Triton X-100 为例简要介绍如下。
实验材料	溶解培养的动物细胞
试剂、试剂盒	缓冲盐液 TBS
仪器、耗材	试管
实验步骤	1. 用缓冲盐液（TBS：10 mmol／L pH7.5 Tris-HCl，150 mmol／L NaCl） 4℃：洗细胞几次； 2. 离心除去缓冲盐液，在含 0.1 ％～0.3 ％ Triton X-100 的缓冲盐液（TBS）中混悬细胞（10⁷～ 10⁸ 细胞／ml 或总蛋白 3 ～ 4 mg／ml）； 3. 混旋或颠倒试管几次后，冰浴中孵育 10 ～60 min。
注意事项	1. 低浓度表面活性剂处理。如能充分溶解细胞，则它是很温和的方法。 2. 若目的蛋白不稳定，冰浴中孵育时间可以减少甚至取消；裂解液内加入 0.2 倍体积 50％甘油也可以稳定目的蛋白。 3. Triton X-100 以外的表面活性剂也可以用。 4. 此法主要用于溶解培养的动物细胞。
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