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细胞破碎和蛋白质溶解实验一化学渗透法

发布时间:2018-11-15 10:33:59 阅读量:160次



实验方法原理

有些有机溶剂(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性剂(SDS、Triton X-100)、金属整合剂(EDTA) 、变性剂(盐酸胍、脲)等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性,使内含物有选择地渗透出来。这种处理方式就是化学渗透法。本文仅以表面活性剂 Triton X-100 为例简要介绍如下。

实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤

1. 用缓冲盐液(TBS:10 mmol/L pH7.5 Tris-HCl,150 mmol/L NaCl) 4℃:洗细胞几次;


2. 离心除去缓冲盐液,在 含 0.1 %~0.3 % Triton X-100 的缓冲盐液(TBS) 中混悬细胞(107~ 108 细胞/ml 或总蛋白 3 ~ 4 mg/ml);


3. 混旋或颠倒试管几次后,冰浴中孵育 10 ~60 min。

注意事项

1. 低浓度表面活性剂处理。如能充分溶解细胞,则它是很温和的方法。


2. 若目的蛋白不稳定,冰浴中孵育时间可以减少甚至取消;裂解液内加入 0.2 倍体积 50% 甘油也可以稳定目的蛋白。


3. Triton X-100 以外的表面活性剂也可以用。


4. 此法主要用于溶解培养的动物细胞。

其他