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细胞破碎和蛋白质溶解实验一酶溶法

发布时间:2018-11-15 10:33:59 阅读量:129次



实验方法原理 酶溶法就是用生物酶将细胞壁和细胞膜消化溶解的方法。因此利用此方法处理细胞必须根据细胞的结构和化学组成选择适当的酶。常用的有溶菌酶、β-1,3-葡聚糖酶、β-1,6-葡聚糖酶、蛋白酶、甘露糖酶、糖苷酶、肽链内切酶、壳多糖酶等、细菌主要用溶菌酶处理,酵母需要用几种酶进行复合处理。使用溶酶系统时要注意控制温度、酸碱度、酶用量、先后次序及时间。这里仅以溶菌酶处理大肠杆菌为例,介绍具体体方法如下。
实验材料
试剂、试剂盒
实验步骤

1. 混悬洗过的大肠杆菌于 TE 缓冲液内,每克细菌需 3 ml 缓冲液。调整温度至 20℃~37℃;


2. 每 5 ml 混悬液加入1 mg 溶菌酶,可以从新配制 10 mg/ml 的母液吸取或直接用酶的冻干粉;


3. 在 20℃~37℃ 温育 10~20 min,同时轻轻摇动。

注意事项
1. 增加溶菌酶的浓度,如高达 10 mg/ml,能更快的溶解细菌,用更高的浓度甚至在 4℃ 作用 5 min 即可获得满意的溶解。


2. 虽然酶溶法有选择性释放产物、核酸泄出量少、细胞外形完整等优点,但它也存在明显不足:如酶价格高、通用性差、有时存在产物抑制。


其他