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细胞破碎和蛋白质溶解实验一高压匀浆法

发布时间:2018-11-15 10:33:59 阅读量:228次



实验方法原理 细胞悬液从高压室的环状隙高速喷射到静止的撞击环上,被迫改变方向经出口管流出。此过程中细胞经历了高速造成的剪切、碰撞及高压到常压的变化,从而破碎释放内含物。增加压力或增加破碎次数都能提高破碎效率,但压力增加到一定程度零部件磨损较大。通常撞击环较易磨损应定期更换。为防止污染,使用前后高压室至出口管需彻底清洁。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 用裂解缓冲液混悬清洗过的细胞。通常细胞湿重(g )与缓冲液体积(ml)之比的范围是 1/1 到 1/4;


2. 加样品液进入高压室,并提升压力至预定值(一般 0.55×108~1.38×108 Pa);


3. 维持上述压力,调整出口流速为每分钟 2~3 ml(约每秒 1 滴)。

注意事项

1. 该法常用来裂解细菌和酵母。


2. 适用于中等体积(10~30 ml)的样品,体积太大或太小均不适宜。


3. 为获得样品最佳破碎效果,样品可以第二次甚至第三次通过高压匀浆。


4. 温度敏感物质有必要低温操作。多次实施时,每次样品要冷。

其他