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细胞破碎和蛋白质溶解实验一匀浆法

发布时间:2018-11-15 10:33:59 阅读量:85次



实验方法原理

通过固体剪切力破碎组织和细胞,释放蛋白进入溶液。市售的匀浆器主要有四类,刀片式组织破碎匀浆器、内切式组织匀浆器、玻璃匀浆器和用于规模生产的髙压匀浆器。玻璃匀浆器的匀浆头(杵)有玻璃制的,也有特夫隆制的,既可以手动也可以电动。由于匀浆过程中蛋白质被蛋白酶降解的可能性较小,所以匀浆是简便、迅速和风险小的组织破碎方法,是实验室首先考虑的方法之一。

实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤

1. 用组织剪或芋术刀迅速将清洗的组织分离成适宜的小块,如 1 cm3


2. 每体积湿重组织通常加 3~5 倍体积预冷的匀浆缓冲液至匀浆容器内;


3. 制备匀浆 :


3.1 电力驱动的玻璃匀浆器以 500~1500 r/min 的速度,匀浆 3~6 次,每次 5~10 s 。


3.2 手动玻璃匀浆器匀浆 10 ~20 次。


3.3 刀片式组织破碎匀浆器和内切式组织匀浆器以 1000~3000 r/min 的速度,高速匀浆 3 次 ,每次 20~30 s,次间暂停几秒。

注意事项

1. 玻璃匀浆器杵和臼之间的空隙应为 0.35~0.70 mm。 电动玻璃匀浆器常用于匀桨肝、心、肌肉等软组织的匀浆;手动玻璃匀浆器常用于培养细胞和脑组织等的匀浆。


2. 匀浆过程应注意维持低温。玻璃匀浆器可外置冰水浴,其他匀浆容器可预冷或在冷室内匀浆。


3. 匀浆时所霈匀浆缓冲液的体积在不同条件下可有很大差别,有时甚至可为湿重组织体积的 9~10 倍。


4. 匀浆的效果可以用相差显微镜观察组织细胞状况评估,也可定量单位湿重组织释放的蛋白质含量监控。

其他