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如何看流式细胞术结果中的图

发布时间:2015-05-15 11:08:00 阅读量:63023次



FCM数据的存贮的方式是FCS2.0(flow cytometry standard),采用列表排队(List Mode)方式。易于加工处理分析,但缺乏直观性,数据的显示通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种;由数据还可以做出标准曲线进行定量分析。

Q1:坐标轴的意义?

1、  单参数直方图

每一个细胞单参数的测量数据可以整理成统计分布,以直方图的方式来显示。在图中,横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度的值,其单位是道数(channel),可以是线形(line)或者对数(log)。纵坐标一般是相对细胞/粒子数(count)!

2、  二维图

在二维图的中,横坐标/纵坐标都表示荧光信号或散射光信号相对强度的值,可以是线形(line)或者对数(log)。双参数图可以将样品细胞群分开,从而方便对感兴趣的细胞进行分析。Q2:“Gate”和 “Regin”?

设门是流式细胞分析中一种重要的技术,只有通过最佳的设门方式,才能准确地获取和分析数据,从而得到临床诊断和科研中有价值的信息。

On-line gating(threshold gating)监测/获取数据
Off-line gating: 分析实验数据          散射光设门/荧光设门          散射光/荧光联合设门         

多重逻辑门(组合门)多重逻辑门 G3=R1 and R2 (G3=R1×R2)

其它: G=R1 or R2 G=R1 not R2Q3:流式图中的颜色与荧光颜色?

流式图中的颜色为区分不同细胞群而人为指定, 与荧光颜色无关!!

Q4:流式图中的阴/阳(N/P)如何划分?

如何做M1阴性界限?实际上,这个M1的划分完全是根据阴性(同型)对照来的!如下图:左图为同型对照,即:您所检测的物质在阴性组中的基础表达量,可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。右图即阳性组,也就是接受刺激后,功能状态下、药物作用后等。Q5:  这么巧,阴性正好在101划分??

其实, 我们可以人为地将电压,放大倍数调到相应的大小,使阴性的右边界在某一个值上,(通常划在101附近)这样后期做sample时好看!当然也可以调到102,103次方。

Q6:为什么要进行荧光补偿?

流式细胞分析中经常要用到2种以上的荧光标记抗体进行染色,而目前所使用的多种荧光染料发射谱间有一定重叠。

“荧光补偿”这个术语是指修正荧光渗漏的过程,如从探测器除去除匹配荧光以外的任何荧光信号。
编辑: wudihero007